qPCR(定量聚合酶链式反应)检测结果的准确性可能受到多种因素的影响,以下是一些关键因素:1.**引物和探针设计**:引物和探针的设计质量对qPCR的成功至关重要。不合适的引物设计可能导致低特异性或效率低的PCR反应。引物的选择应考虑引物的长度、Tm值(解离温度)和GC含量,以确保其适用于特定的核酸模板。2.**模板质量和纯度**:模板的质量和纯度直接影响qPCR的结果。污染或降解的模板可能导致偏差或虚假阳性结果。使用质量高、纯度高的DNA或RNA样本是确保准确和可靠的qPCR结果的关键。3.**反应条件和缓冲液**:PCR反应条件,包括温度、离子浓度和缓冲液成分,必须严格控制。温度梯度、离子浓度的变化或缓冲液成分的误配可能会影响PCR效率。4.**反应容器和耗材**:反应管、微孔板、封闭膜等反应容器和耗材的质量也会影响qPCR结果。低质量的材料可能导致样本丢失或反应失效。5.**标准曲线和校准**:标准曲线的准备和校准非常重要。不正确的标准曲线可能导致定量结果的不准确性。确保标准曲线中包含适当的对照样品,并使用线性拟合来生成准确的定量数据。6.**环境条件**:实验室温度、湿度和空气质量都可以影响qPCR实验的结果。不稳定的环境条件可能导致实验结果的不稳定性。将含有重组质粒的表达载体转化到宿主细胞中,通常是大肠杆菌或其他合适的细胞系。Recombinant Cynomolgus 4-1BB Ligand/TNFSF9 Protein,hFc Tag
在PCR产物的克隆中,Lambda核酸外切酶(λExonuclease)有其特定的应用和优势,但它不能完全替代其他酶。以下是一些替代酶和它们的特点:1.**ExonucleaseIII(ExoIII)**:-ExoIII具有3'→5'外切脱氧核糖核酸酶活性,尤其适合双链DNA的平末端、5'-突出末端或切口,从DNA链的3'-端释放5'-单磷酸核苷酸,产生单链DNA片段。-与Lambda核酸外切酶相比,ExoIII对具有3'-突出末端的DNA有活性,而Lambda核酸外切酶则对5'-磷酸化的双链DNA有更高的活性。2.**TaqDNA聚合酶**:-在平端克隆中,可以使用TaqDNA聚合酶和dATP进行“3'dA加尾”,以提高连接效率。-这种方法通过在PCR产物的3'端添加突出的腺嘌呤(dA),增加了与载体连接的可能性,从而提高克隆效率。3.**TOPO克隆载体**:-TOPO克隆载体含有共价连接的DNA拓扑异构酶I,可同时作为限制性内切酶和连接酶。-与传统PCR克隆载体相比,TOPO克隆载体具有更短的连接反应时间、更高的克隆效率以及更简单的分子克隆实验方案。综上所述,虽然Lambda核酸外切酶在特定情况下非常有用,但它不能完全替代其他酶。每种酶都有其独特的特性和应用场景,选择合适的酶取决于具体的克隆需求和实验设计。Recombinant Cynomolgus 4-1BB Ligand/TNFSF9 Protein,hFc Tag泛素激起酶E1(Ubiquitin-activating enzyme E1)在ATP的存在下激发泛素分子,形成E1-泛素硫酯中间体。
牛痘DNA拓扑异构酶I(VacciniaVirusDNATopoisomeraseI)与细菌DNA拓扑异构酶的主要区别如下:1.**来源不同**:-牛痘DNA拓扑异构酶I来源于牛痘病毒,是一种真核生物病毒中的酶。-细菌DNA拓扑异构酶则来源于原核生物,如大肠杆菌的ω蛋白等。2.**功能特性**:-牛痘DNA拓扑异构酶I能够解旋DNA的超螺旋结构,并且识别并切割双链DNA末端[5’C(T)CCTT],与DNA形成共价连接形成稳定复合物,遇到DNA的5’-OH基团后,重新连接形成完整DNA链。-细菌DNA拓扑异构酶,如大肠杆菌的ω蛋白,主要功能是催化DNA链断开和结合的偶联反应,以改变DNA的拓扑结构。3.**活性条件**:-牛痘DNA拓扑异构酶I即使在Mg2+不存在的条件下也显示活性。-细菌DNA拓扑异构酶可能需要Mg2+等金属离子作为辅因子来发挥活性。4.**作用的DNA链**:-牛痘DNA拓扑异构酶I能使正负两方的超螺旋分子均形成松散型。-原核生物由来的DNA拓扑异构酶I只作用负链的超螺旋分子。5.**共价键形成**:-牛痘DNA拓扑异构酶I与DNA形成共价连接,此酯键中所贮存的能量可能在切断端的再结合上起着作用。-细菌DNA拓扑异构酶在原核生物中是游离型的5′-OH末端扣3′-磷酸末端与酶形成共价键。
高灵敏度与特异性该试剂采用热启动Taq DNA聚合酶,结合抗体封闭技术,有效避免了低温条件下的非特异性扩增,提高了反应的特异性和灵敏度。探针法qPCR通过荧光探针与目标基因的特异性结合,避免了非特异性产物的干扰,检测灵敏度和特异性高于传统的SYBR Green方法。低浓度ROX校正染料试剂中含有低浓度ROX作为被动参考染料,能够有效校正孔间荧光信号的差异,减少因移液误差或样品蒸发等因素引起的荧光波动,确保实验结果的稳定性和重复性。UDG防污染系统内置UDG(Uracil-DNA Glycosylase)防污染系统,通过降解含有尿嘧啶的PCR产物,有效防止了实验室中残留的PCR产物对实验结果的干扰,避免假阳性结果的出现。快速扩增与多重检测优化的反应体系支持快速扩增程序,可在短时间内完成高灵敏度检测,同时适用于多重PCR检测,可在单个反应孔中同时检测多个基因。适用性该试剂适用于多种样本类型,包括cDNA、基因组DNA等,尤其适合低丰度基因的定量检测,如低表达的mRNA、lncRNA、小RNA等。泛素蛋白是一种在真核细胞中存在的小分子蛋白质,由76个氨基酸残基组成,具有高度的保守性。
Pfu DNA Polymerase:高保真PCR的选择Pfu DNA Polymerase(Pfu酶)是一种源自嗜热菌 Pyrococcus furiosus 的高保真DNA聚合酶,因其性能和广泛的应用而备受科研工作者青睐。产品特点Pfu DNA Polymerase具有高度的热稳定性和保真性。其分子量为90 kDa,具备5'-3' DNA聚合酶活性和3'-5'外切酶活性,能够在PCR扩增过程中纠正错误掺入的碱基,降低错误率。与传统的Taq DNA聚合酶相比,Pfu酶的保真性高出8倍以上,错误率为1.3×10⁻⁶。此外,Pfu酶在95°C孵育1小时后仍能保持90%以上的活性。性能优势Pfu DNA Polymerase在扩增效率和速度上也表现出色。其扩增速度可达4 kb/min,是普通Pfu酶的8倍。这种高效的扩增能力使其能够快速、准确地扩增长片段DNA,可扩增长度达10 kb。同时,Pfu酶对低浓度模板的检测灵敏度极高,即使在1 pg的模板量下也能有效扩增。Endo H 的活性受 pH 值的强烈影响,通常在酸性条件下表现出好的活性,一般合适 pH 范围在 5.0-6.0 左右。Recombinant Human XCR1 Protein-VLP
与Taq DNA Polymerase不同,Pfu DNA Polymerase产生的PCR产物为平滑末端,无3'端"A"突出。Recombinant Cynomolgus 4-1BB Ligand/TNFSF9 Protein,hFc Tag
高纯度与稳定性dATP Solution (100 mM)采用高纯度的钠盐形式,纯度达到99%以上,通过HPLC检测确保其质量。这种高纯度的dATP溶液能够有效避免杂质对实验的干扰,确保实验结果的可靠性。此外,该产品在-20℃下保存时,有效期可达2年,且避免反复冻融后仍能保持稳定。广泛的应用场景dATP Solution (100 mM)适用于多种分子生物学实验,包括但不限于PCR、real-time PCR、RT-PCR、cDNA合成、引物延伸反应、DNA测序和DNA标记等。其100 mM的浓度设计能够满足大多数实验需求,同时避免了因浓度过低而导致的反应效率低下问题。无核酸酶污染在分子生物学实验中,核酸酶污染可能导致实验失败。dATP Solution (100 mM)经过严格检测,确保无DNase和RNase污染,从而保证实验样本的完整性和实验结果的准确性。即用型设计该产品以即用型溶液形式提供,无需额外处理即可直接用于实验。这种设计简化了实验操作流程,节省了研究人员的时间和精力。此外,其pH值经过精确调节,通常在7.0至7.5之间,确保在各种反应条件下都能保持好活性。Recombinant Cynomolgus 4-1BB Ligand/TNFSF9 Protein,hFc Tag
Recombinant Human CD300c/LMIR2 Protein
Recombinant Cynomolgus CD228/MFI2 Protein
Recombinant Mouse ADAM8 Protein
Recombinant Human PCSK9 Protein
dUTP
Recombinant Human CD200/OX2 (His Tag)
Recombinant Human S100B
PspGI (EcoRII)限制性内切酶
Recombinant Rat GDNF Protein
Recombinant Cynomolgus LRRC15/LIB Protein