厦门细胞高效转染试剂服务电话

细胞转染，你至少要掌握以下几点：主要有下面几种方法：：化学法：磷酸钙法、DEAE-右旋糖苷法、阳离子脂质体法；物理法：电穿孔法、显微注射法、颗粒传递法；细菌介导法：逆转录细菌、腺细菌A.阳离子脂质体法：带正电的脂质体与核酸带负电的磷酸基团形成复合物被细胞内吞。特点：简单通用，适用性广，转染效率高，重复性好，但转染时需除血清，转染效率随细胞类型变化大。由于脂质体复合物与贴壁细胞的接触机会远大于悬浮细胞，所以贴壁比悬浮转染效率要高。悬浮细胞建议使用电穿孔法。B.电穿孔法：利用高压电脉冲对细胞膜的干扰，使其形成利于核酸进入的微孔其它物理和化学介导的转染方法，则各有其特点。厦门细胞高效转染试剂服务电话

细胞转染常用步骤：1.转染试剂的准备①将400ul去核酸酶水加入管中，震荡10秒钟，溶解脂状物。②震荡后将试剂放在－20摄氏度保存，使用前还需震荡。2.选择合适的混合比例(1：1－1：2/脂质体体积：DNA质量)来转染细胞。在一个转染管中加入合适体积的无血清培养基。加入合适质量的MyoD或者EGFP的DNA，震荡后在加入合适体积的转染试剂，再次震荡。3.将混合液在室温放置10―15分钟。4.吸去培养板中的培养基，用PBS或者无血清培养基清洗一次。5.加入混合液，将细胞放回培养箱中培养一个小时。6.到时后，根据细胞种类决定是否移除混合液，之后加入完全培养基继续培养24－48小时~无锡正规细胞高效转染试剂厂家推荐操作简便，对细胞毒性小，转染效率高受到研究者们的青睐。

细胞转染的注意事项：1.细胞铺板密度用于转染的较佳细胞密度根据不同的细胞类型或应用而异。因转染试剂对细胞有毒害作用，细胞太少，容易死。一般转染时，贴壁细胞密度为70%-90%，悬浮细胞密度为2-4×106细胞/ml，确保转染时细胞没有长满或处于静止期。因为转染效率对细胞密度很敏感，所以在不同实验间保持一个基本的传代步骤很重要。铺板细胞数目的增加可以增加转染活性和细胞产量。细胞的融合度必须要达到90%才能做启动子的选择获得高转染活性所需选择的启动子依赖于选用的细胞系和要表达的蛋白。CMV启动子在大多数细胞类型中可以获得高表达活性。同其他启动子，如SV40和RSV(劳斯肉瘤细菌)相比，在BHK-21中其活性较高。这三种细菌启动子在T细胞来源的细胞系，如Jurkat中组成表达水平较低。转染后在培养基中加入PHA-L和PMA可以启动Jurkat细胞中CMV启动子，而单PMA就足以启动KG1和K562(人骨髓瘤白细胞)中的CMV启动子。SV40启动子的表达在含有大T抗原(存在于COS-1和COS-7)时会提高，因为大T抗原可以刺激染色体外的合成。

细胞转染实验简介：实验原理外源基因进入细胞主要有四种方法：电击法、磷酸钙法和脂质体介导法和细菌介导法。电击法是在细胞上短时间暂时性的穿孔让外源质粒进入;磷酸钙法和脂质体法是利用不同的载体物质携带质粒通过直接穿膜或者膜融合的方法使得外源基因进入细胞;细菌法是利用包装了外源基因的细菌传染细胞的方法使得其进入细胞。但是由于电击法和磷酸钙法的实验条件控制较严、难度较大;细菌法的前期准备较复杂、而且可能对于细胞有较大影响;所以现在对于很多普通细胞系，一般的瞬时转染方法多采用脂质体法~细胞铺板密度用于转染的较佳细胞密度根据不同的细胞类型或应用而异。

转染的注意事项：培养基中的物品物品，比如青霉素和链霉素，是影响转染的培养基添加物。这些物品一般对于真核细胞无毒，但阳离子脂质体试剂增加了细胞的通透性，使物品可以进入细胞。这降低了细胞的活性，导致转染效率低。所以，在转染培养基中不能使用物品，甚至在准备转染前进行细胞铺板时也要避免使用物品。这样，在转染前也不必润洗细胞。对于稳定转染，不要在选择性培养基中使用青霉素和链霉素，因为这些物品是GENETICIN选择性物品的竞争性克制剂。瞬时和稳定表达DNA转染后，转入基因的表达可以在1－4天内检测到。苏州细胞高效转染试剂供应商

代细胞和传代次数多的细胞都不是较佳选择。厦门细胞高效转染试剂服务电话

瞬时转染和转染效率的监测：基因的瞬时表达在24-72小时内就结束了。这种快速的瞬时表达非常适用于验证质粒表达和监测转染步骤的效率。可以使用报告基因来确定优化条件，其表达蛋白易检测，在目的细胞中不含此蛋白或水平很低。常用的报告基因包括氯霉素乙酰转移酶（CAT），绿色荧光蛋白（GFP），荧光素酶（Lux或Luc）以及b-半乳糖苷酶（b-gal）。可以使用简单的非同位素方法检测b-gal的表达以测定转染效率和活性。pCMVSPORT-bgal质粒包含CMV启动子调控下的LacZ基因，转染入真核细胞内后可以直接表达bgal。结合简单的检测步骤，可以做为监测转染条件的一种方便灵敏的方法厦门细胞高效转染试剂服务电话